Particules Lentivirales d'Activation (m) SV2A: sc-425665-LAC

Sv2a code la glycoprotéine 2A des vésicules synaptiques (SV2A), une protéine membranaire abondante des vésicules de sécrétion qui soutient la libération de neurotransmetteurs dépendante du Ca2+ et le cycle présynaptique des vésicules. SV2A influence l’amorçage des vésicules et l’exocytose en régulant le trafic des protéines vésiculaires et en interagissant avec des composants de la machinerie de libération, façonnant ainsi la transmission synaptique et l’excitabilité des réseaux. Dans le système nerveux de la souris, l’expression de SV2A est souvent utilisée comme marqueur indirect de la densité synaptique et de la maturation, et elle est impliquée dans le remodelage synaptique dépendant de l’activité. Des niveaux ou une fonction de SV2A altérés ont été associés à des dysfonctionnements neurophysiologiques et à des phénotypes liés aux crises, ce qui fait de Sv2a une cible utile pour des études mécanistiques de la signalisation neuronale et du neurodéveloppement.

Les particules d'activation lentivirales SV2A (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Sv2a dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SV2A (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Sv2a, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de SV2A. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Sv2a ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.