SURF-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423221

Panoramica

Surf4 codifica SURF-4, un recettore di carico di membrana del reticolo endoplasmatico (RE) che partecipa all’esportazione selettiva di proteine secretorie dal RE all’apparato di Golgi tramite traffico dipendente da COPII. SURF-4 contribuisce alla proteostasi regolando la ritenzione nel RE rispetto al trasporto in avanti, influenzando così l’efficienza di secrezione e la risposta cellulare alle proteine mal ripiegate. Nei sistemi murini, la funzione di Surf4 si interseca con vie che controllano la gestione dei lipidi, l’abbondanza di proteine extracellulari e la segnalazione dello stress del RE, rendendolo rilevante per studi sulla regolazione metabolica e sull’omeostasi della via secretoria. L’alterazione del traffico mediato da SURF-4 viene utilizzata per modellare meccanismi che collegano difetti di secrezione a disfunzioni cellulari e fenotipi associati a malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SURF-4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Surf4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Surf4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Surf4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SURF-4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Surf4 per lo studio della segnalazione di SURF-4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Surf4 critici per la funzione di SURF-4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Surf4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SURF-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SURF-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Surf4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SURF-4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SURF-4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Surf4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Surf4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.