SURF-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423220

Panoramica

Surf2 codifica SURF-2, una proteina nucleare conservata del cluster genico surfeit, che è stata collegata al controllo fondamentale dell’espressione genica. SURF-2 è implicata nella regolazione trascrizionale dipendente dall’RNA polimerasi II e in processi associati alla cromatina che influenzano l’omeostasi cellulare. La perturbazione delle reti regolatorie associate a SURF-2 può incidere su proliferazione, risposte allo stress e programmi di differenziamento, rendendo Surf2 un nodo utile per studiare la manutenzione del genoma e il buffering trascrizionale. Un’espressione alterata dei geni del cluster surfeit è stata osservata in molteplici contesti rilevanti per la malattia, a supporto di indagini meccanicistiche su Surf2 negli stati di espressione genica deregolata.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SURF-2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Surf2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Surf2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Surf2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SURF-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Surf2 per lo studio della segnalazione di SURF-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Surf2 critici per la funzione di SURF-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Surf2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SURF-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SURF-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Surf2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SURF-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SURF-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Surf2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Surf2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.