Plasmide Double Nickase (h) Sur-8: sc-409478-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Sur-8 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Sur-8 Double Nickase (h) et le plasmide Sur-8 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SHOC2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Sur-8 Antibody (D-8): sc-514779
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Sur-8 | sc-409478-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Sur-8 | sc-409478-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SHOC2 code pour Sur-8, une protéine d’échafaudage à répétitions riches en leucine qui facilite l’activation de RAF1 dépendante de RAS et amplifie la signalisation MAPK/ERK en aval des récepteurs à activité tyrosine kinase. En favorisant l’assemblage des complexes de signalisation RAS–RAF, Sur-8 influence la prolifération, la différenciation et la régulation par rétrocontrôle au sein de la cascade ERK, avec des liens supplémentaires avec la signalisation de l’EGFR et celle associée aux intégrines. Une altération de la fonction de SHOC2 est impliquée dans des syndromes du développement tels que le trouble de type Noonan avec cheveux anagènes lâches et a été étudiée pour sa contribution à des programmes de signalisation MAPK dérégulés, pertinents dans des contextes de RAS oncogénique. SHOC2 constitue donc un nœud utile pour disséquer la dynamique des voies, la propagation du signal dépendante des échafaudages et les relations génotype–phénotype dans les cellules humaines.
Sur-8 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SHOC2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SHOC2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SHOC2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SHOC2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.