Sur-8 Double Nickaseプラスミド (h): sc-409478-NIC

SHOC2は、RAS依存的なRAF1活性化を促進し、受容体型チロシンキナーゼの下流におけるMAPK/ERKシグナル伝達を増幅する、ロイシンリッチリピート（LRR）を有する足場（スキャフォールド）タンパク質Sur-8をコードします。Sur-8はRAS–RAFシグナル複合体の形成を促すことで、ERKカスケード内の増殖・分化・フィードバック制御に影響を与え、さらにEGFRやインテグリン関連シグナルとも結びつきがあります。SHOC2の機能異常は、疎な成長期毛を伴うヌーナン様疾患などの発達性症候群に関与するとされ、がん化RASの文脈に関連するMAPKシグナル伝達プログラムの破綻への寄与についても研究されています。そのためSHOC2は、ヒト細胞における経路ダイナミクス、スキャフォールド依存的なシグナル伝播、ならびに遺伝子型—表現型の関係を解析するうえで有用な結節点となります。

Sur-8 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SHOC2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SHOC2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SHOC2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SHOC2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。