Plásmido Doble Nickase (h) Superoxide Dismutase 1/SOD1: sc-400186-NIC

SOD1 codifica la superóxido dismutasa citosólica Cu/Zn, que cataliza la dismutación de los radicales superóxido a peróxido de hidrógeno y oxígeno, constituyendo una primera línea de defensa frente al estrés oxidativo. Al controlar el flujo de especies reactivas de oxígeno, SOD1 influye en la homeostasis redox, la función mitocondrial y las vías de señalización posteriores que acoplan la carga oxidativa con la inflamación, la proteostasis y los programas de supervivencia celular. La actividad o estabilidad desreguladas de SOD1 se asocian con una capacidad antioxidante alterada y con estados propensos a la agregación que perturban la biología de las motoneuronas y la glía. En consecuencia, SOD1 se estudia ampliamente en neurodegeneración, en la remodelación metabólica sensible al estado redox y en redes de respuesta celular al estrés.

Superoxide Dismutase 1/SOD1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SOD1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SOD1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SOD1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SOD1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.