Plásmido CRISPR de Activación (h) Superoxide Dismutase 1/SOD1: sc-400186-ACT

SOD1 codifica la superóxido dismutasa citosólica Cu/Zn, que cataliza la dismutación de aniones superóxido en peróxido de hidrógeno y oxígeno, constituyendo una barrera enzimática primaria frente a las especies reactivas de oxígeno. Al modular la homeostasis redox, SOD1 influye en las respuestas al estrés oxidativo, la función mitocondrial y las vías de señalización posteriores que regulan la inflamación, la proteostasis y la apoptosis. La alteración de la actividad de SOD1 perturba la capacidad antioxidante celular y puede contribuir al mal plegamiento de proteínas y a la vulnerabilidad de las neuronas motoras, con gran relevancia para la neurodegeneración y otros fenotipos asociados al estrés. Por ello, la SOD1 humana se estudia ampliamente en modelos de desequilibrio redox, biología de la agregación y disfunción celular vinculada al daño oxidativo.

Superoxide Dismutase 1/SOD1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SOD1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Superoxide Dismutase 1/SOD1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SOD1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SOD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Superoxide Dismutase 1/SOD1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SOD1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Superoxide Dismutase 1/SOD1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Superoxide Dismutase 1/SOD1 en células tumorales con expresión de SOD1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.