Plasmide CRISPR/Cas9 KO SUMO-3 (h): sc-400788

Présentation

SUMO3 code SUMO‑3, un petit modificateur de type ubiquitine qui est conjugué de façon covalente à des protéines cibles afin de réguler leur localisation, leur stabilité et leurs réseaux d’interaction. La SUMOylation dépendante de SUMO‑3 soutient le contrôle dynamique de la transcription, de la signalisation et de la réparation des dommages à l’ADN, de l’organisation de la chromatine et de la progression du cycle cellulaire, et elle interagit avec les voies de l’ubiquitine pour façonner une protéostase adaptative au stress. L’activité de SUMO3 est fréquemment étudiée dans le contexte des réponses au stress cellulaire, du maintien de l’intégrité du génome et de la régulation de l’immunité innée, où des profils de SUMOylation altérés ont été associés à une dérégulation de la signalisation en biologie du cancer, au stress protéotoxique lié aux maladies neurodégénératives et à la physiopathologie inflammatoire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SUMO-3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SUMO3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SUMO3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SUMO3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SUMO-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SUMO3 pour l'étude de la signalisation de SUMO-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SUMO3 essentiels à la fonction de SUMO-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SUMO3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SUMO-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SUMO-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SUMO3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SUMO-3 plasmide HDR (h) et le SUMO-3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SUMO3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SUMO3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.