SULT2A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423184

Übersicht

Das Mausgen *Sult2a1* kodiert die zytosolische Sulfotransferase SULT2A1, ein Enzym, das die 3′-Phosphoadenosin-5′-phosphosulfat-(PAPS-)abhängige Sulfonierung von Hydroxysteroiden und Gallensäure-Zwischenprodukten katalysiert. Diese Phase-II-Konjugationsreaktion moduliert die Bioverfügbarkeit von Steroiden und Oxysterolen, erleichtert die Entgiftung und unterstützt die metabolische Homöostase von Leber und Darm. Die SULT2A1-Aktivität überschneidet sich mit Signal- und Stoffwechselwegen der Gallensäure- und Steroidhormonverarbeitung und kann über eine koordinierte Regulation mit nukleären Rezeptorprogrammen wie FXR und PXR auch den Xenobiotika-Stoffwechsel beeinflussen. Eine veränderte Sulfatierungskapazität ist relevant für Studien zu cholestatischem Stress, Leberentzündung sowie endokrinen und metabolischen Phänotypen in Mausmodellen.

Das SULT2A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sult2a1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sult2a1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sult2a1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SULT2A1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sult2a1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SULT2A1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sult2a1-Exone abzielen, die für die SULT2A1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sult2a1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SULT2A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SULT2A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sult2a1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SULT2A1 HDR-Plasmid (m) und SULT2A1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sult2a1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sult2a1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.