Plásmido CRISPR de Activación (h) Sulfiredoxin: sc-403023-ACT

SRXN1 codifica la sulfiredoxina, una oxidorreductasa dependiente de ATP que restaura las peroxirredoxinas hiperoxidadas (Prx-SO2H) a su forma tiol activa, manteniendo la actividad peroxidasa durante el estrés oxidativo. Al preservar el ciclo de las peroxirredoxinas, la sulfiredoxina contribuye a la homeostasis redox e influye en vías de señalización sensibles a las ROS, incluidas las respuestas antioxidantes impulsadas por Nrf2/ARE y la modulación posterior de la señalización de MAPK y NF-κB. La actividad de SRXN1 se asocia con la adaptación celular en condiciones de hipoxia, inflamación y estrés proteotóxico, y se han descrito cambios en su expresión en diversos contextos de biología del cáncer, neurodegeneración y disfunción metabólica, donde el desequilibrio redox es una característica clave. Estas propiedades hacen de SRXN1 un nodo útil para estudiar la regulación redox de tioles, la reparación del daño oxidativo y los programas transcripcionales inducidos por estrés en células humanas.

Sulfiredoxin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SRXN1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Sulfiredoxin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SRXN1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SRXN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Sulfiredoxin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SRXN1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Sulfiredoxin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Sulfiredoxin en células tumorales con expresión de SRXN1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.