Sulf-2 Double Nickase Plasmid (m2): sc-428206-NIC-2

Das murine Sulf2 kodiert die extrazelluläre Heparansulfat-6-O-Endosulfatase 2 (Sulf-2), ein sezerniertes Enzym, das Heparansulfat an der Zelloberfläche und in der Matrix durch Entfernen von 6-O-Sulfatgruppen umgestaltet und dadurch die Ligandenverfügbarkeit sowie Rezeptorinteraktionen moduliert. Durch die Veränderung von Heparansulfat-Sulfatierungsmustern beeinflusst Sulf-2 zentrale Signalachsen, darunter FGF, WNT, Hedgehog, BMP und Chemokingradienten, und prägt damit Prozesse wie Zellmigration, Gewebemusterbildung, Angiogenese und Entzündungsreaktionen. Eine fehlregulierte SULF2-Aktivität wurde mit veränderter Extrazellulärmatrix-Dynamik und aberranter Signalgebung in Zusammenhängen wie Tumorbiologie, Fibrose und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was Sulf2 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zur glykosaminoglykanabhängigen Signalübertragung macht. Die Geneditierung von Sulf2 in Mausmodellen ermöglicht die funktionelle Aufschlüsselung der sulfatierungsabhängigen Feinabstimmung von Signalwegen, der Regulation extrazellulärer Nischen sowie krankheitsrelevanter mikroumgebungsbezogener Interaktionen in vitro und in vivo.

Sulf-2 Das Double-Nickase-Plasmid (m2) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Sulf2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Sulf2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Sulf2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Sulf2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.