Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sucrase-Isomaltase: sc-401348-ACT

Le gène humain **SI** code la **sucrase-isomaltase**, une glycohydrolase membranaire de la bordure en brosse indispensable à la digestion terminale des glucides alimentaires dans l’intestin grêle. Le complexe enzymatique catalyse l’hydrolyse du saccharose et des liaisons α-1,4/α-1,6 des oligosaccharides dérivés de l’amidon, assurant la disponibilité de monosaccharides pour l’absorption et le métabolisme énergétique de l’épithélium. L’expression et le trafic intracellulaire de SI sont étroitement liés aux programmes de différenciation des entérocytes et à la maturation des protéines apicales au sein de la voie sécrétoire. Une altération de la fonction ou de l’expression de SI est associée à des phénotypes de déficit en disaccharidases et contribue à la variabilité de la prise en charge intestinale des glucides, susceptible d’influencer des états pathologiques gastro-intestinaux.

Sucrase-Isomaltase Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SI sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sucrase-Isomaltase Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SI dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SI, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sucrase-Isomaltase. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SI natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sucrase-Isomaltase au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sucrase-Isomaltase dans les cellules tumorales présentant une expression de SI silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.