Plasmide CRISPR d'Activation (h) striatin: sc-406215-ACT

Le gène humain **STRN** code la striatine, une protéine échafaudage liant la calmoduline, enrichie au sein du complexe **STRIPAK** (striatin-interacting phosphatase and kinase). Grâce à l’assemblage de complexes multiprotéiques, la striatine contribue à coordonner des événements de déphosphorylation dépendants de **PP2A**, à l’interface avec la signalisation **Hippo**, des réseaux de kinases liés à la **MAPK**, ainsi qu’avec la dynamique du cytosquelette et de l’adhérence, qui influencent la polarité cellulaire et la migration. Les perturbations de la signalisation associées à **STRN** ont été étudiées dans le contexte d’une phosphorégulation altérée, de voies de contrôle de la croissance et de fusions géniques oncogéniques impliquant **STRN**, capables de reprogrammer l’activité des kinases. Ces caractéristiques font de la striatine un nœud utile pour analyser les interactions croisées entre voies dépendantes de la phosphorylation et des programmes transcriptionnels spécifiques au contexte dans des modèles cellulaires humains.

striatin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de STRN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

striatin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus STRN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription STRN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de striatin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus STRN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de striatin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie striatin dans les cellules tumorales présentant une expression de STRN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.