Stra6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405364

Panoramica

STRA6 codifica Stra6, un recettore di membrana multipasso che media l’assorbimento cellulare della vitamina A legandosi ai complessi retinolo–proteina legante il retinolo (RBP) sulla superficie cellulare. Controllando la disponibilità intracellulare dei retinoidi, Stra6 influenza la segnalazione dell’acido retinoico e i programmi trascrizionali a valle che regolano la differenziazione, l’omeostasi epiteliale e la definizione dei pattern di sviluppo. L’attività di STRA6 si interseca con le reti del metabolismo dei retinoidi che coinvolgono LRAT, gli enzimi RDH/ALDH e i recettori nucleari dell’acido retinoico, contribuendo così a determinare le decisioni sul destino cellulare e l’integrità dei tessuti. La disregolazione o le varianti genetiche di STRA6 sono state associate ad anomalie dello sviluppo e a fenotipi legati alla visione, coerenti con un’alterazione del trasporto e della segnalazione dei retinoidi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Stra6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene STRA6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del STRA6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto STRA6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Stra6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di STRA6 per lo studio della segnalazione di Stra6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni STRA6 critici per la funzione di Stra6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di STRA6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Stra6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Stra6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus STRA6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Stra6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Stra6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia STRA6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio STRA6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.