STOX1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-407515-ACT

STOX1 (storkhead box 1) codiert einen Winged-Helix-Transkriptionsfaktor, der an DNA bindet und Genprogramme moduliert, die Zellschicksalsentscheidungen, Differenzierung und stressresponsive Transkription steuern. In menschlichen Geweben wird STOX1 mit der Regulation der Trophoblastenfunktion und der Plazentaentwicklung in Verbindung gebracht; beschrieben wurden Zusammenhänge mit veränderten transkriptionellen Netzwerken, die Invasion, den Umgang mit oxidativem Stress und inflammatorische Signalwege betreffen. Eine dysregulierte STOX1-Expression wurde mit schwangerschaftsassoziierten Erkrankungen wie Präeklampsie in Zusammenhang gebracht; zudem wird STOX1 aufgrund möglicher Rollen in neuroentwicklungs- und neurodegenerativen Signalwegen untersucht, vermittelt über Effekte auf die neuronale Genexpression. Als transkriptioneller Regulator bietet STOX1 einen nützlichen Ansatzpunkt, um in verschiedenen Zellmodellen sowohl übergeordnete regulatorische Schaltkreise als auch nachgeschaltete Zielgene zu analysieren.

STOX1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen STOX1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

STOX1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des STOX1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der STOX1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen STOX1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native STOX1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von STOX1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des STOX1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem STOX1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.