Stomatin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402491-ACT

ヒトSTOMはストマチン（stomatin）をコードしており、脂質ラフトに豊富に存在する膜貫通タンパク質として、膜の組織化やイオンチャネル活性を調節します。これには、機械感受性チャネルや上皮性ナトリウムチャネル（ENaC）複合体の制御が含まれます。ストマチンは、細胞骨格とのカップリング、小胞輸送、ならびに膜マイクロドメイン依存的なシグナル伝達に関与し、細胞容積の制御やストレス応答に影響を与えます。STOMの発現量や膜局在の変化は、遺伝性ストマトサイトーシスなどの赤血球膜異常と関連づけられており、細胞のバイオメカニクスやイオン恒常性にも影響し得ます。ラフト関連の足場タンパク質として、ストマチンは膜張力のセンシング、イオン輸送、炎症性あるいは代謝性ストレスへの適応を結び付ける経路において、しばしば研究対象となっています。

Stomatin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性STOMの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Stomatin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における STOM 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSTOM転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Stomatinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSTOM遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるStomatin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSTOM発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるStomatin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。