Stomatin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402491-ACT

Das humane **STOM**-Gen kodiert **Stomatin**, ein integrales Membranprotein, das in Lipid-Rafts angereichert ist und die Membranorganisation sowie die Aktivität von Ionenkanälen moduliert, einschließlich der Regulation mechanosensitiver Kanal- und epithelialer Natriumkanal-Komplexe. Stomatin trägt zur Kopplung an das Zytoskelett, zum vesikulären Transport und zu einer von Membran-Mikrodomänen abhängigen Signalübertragung bei, die die Kontrolle des Zellvolumens und Stressantworten beeinflussen. Veränderte STOM-Expression oder Membranlokalisation wurde mit Defekten der Erythrozytenmembran wie der hereditären Stomatozytose in Verbindung gebracht und kann die zelluläre Biomechanik sowie die Ionenhomöostase beeinträchtigen. Als raft-assoziiertes Gerüstprotein wird Stomatin häufig in Signalwegen untersucht, die Membranspannungssensorik, Ionentransport und die Anpassung an entzündlichen oder metabolischen Stress verknüpfen.

Stomatin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen STOM-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Stomatin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des STOM-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der STOM-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Stomatin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native STOM-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Stomatin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Stomatin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem STOM-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.