Plasmide CRISPR/Cas9 KO STK16 (m): sc-423194

Présentation

Le gène murin **Stk16** code la kinase sérine/thréonine 16 (**STK16**), une kinase constitutivement active enrichie au niveau de l’appareil de Golgi et des compartiments associés aux membranes, qui contribue au trafic protéique, à l’organisation du Golgi et à la régulation de la dynamique de la voie sécrétoire. L’activité de STK16 a été associée au contrôle des programmes de croissance et de survie cellulaires, avec des interactions rapportées avec des nœuds de signalisation influençant la prolifération et les réponses au stress. En modulant des processus dépendants de la phosphorylation, STK16 peut façonner le transport intracellulaire et des phénotypes liés au cycle cellulaire, pertinents pour l’étude de l’homéostasie tissulaire. Une signalisation des kinases dérégulée et des réseaux de trafic altérés sont fréquemment observés dans des états cellulaires associés à des maladies, faisant de **Stk16** une cible utile pour l’exploration mécanistique des dépendances aux voies de signalisation dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO STK16 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Stk16 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Stk16, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Stk16 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine STK16.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Stk16 pour l'étude de la signalisation de STK16, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Stk16 essentiels à la fonction de STK16
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Stk16 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le STK16 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le STK16 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Stk16. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le STK16 plasmide HDR (m) et le STK16 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Stk16 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Stk16 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.