Plasmide CRISPR/Cas9 KO Stim2 (m): sc-431161

Présentation

Stim2 (stromal interaction molecule 2) est un capteur de Ca2+ du réticulum endoplasmique qui couple l’épuisement des réserves de Ca2+ du RE à l’entrée de calcium opérée par les réserves (SOCE) en régulant l’activité des canaux Orai aux jonctions entre le RE et la membrane plasmique. Dans les cellules murines, STIM2 contribue au maintien des niveaux basaux de Ca2+ cytosolique et module l’amplitude ainsi que la durée de la signalisation dépendante du Ca2+, ce qui influence la transcription contrôlée par NFAT, la fonction synaptique et les programmes d’activation des cellules immunitaires. Via ces réseaux de signalisation calcique, Stim2 est associé à des processus tels que l’excitabilité et la plasticité neuronales, les réponses aux cytokines et l’adaptation au stress cellulaire. Une SOCE dérégulée et une signalisation dépendante de STIM2 ont été impliquées dans des mécanismes liés à des maladies comme la neuroinflammation, l’auto-immunité et des altérations des voies de survie cellulaire, faisant de Stim2 une cible utile pour des études mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Stim2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Stim2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Stim2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Stim2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Stim2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Stim2 pour l'étude de la signalisation de Stim2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Stim2 essentiels à la fonction de Stim2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Stim2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Stim2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Stim2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Stim2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Stim2 plasmide HDR (m) et le Stim2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Stim2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Stim2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.