Stim1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401311

Übersicht

STIM1 kodiert das stromale Interaktionsmolekül 1 (Stim1), einen Ca2+-Sensor des endoplasmatischen Retikulums, der den store-operated calcium entry (SOCE) initiiert, indem er die Entleerung der ER-Ca2+-Speicher mit der Aktivierung von ORAI-Kanälen an Kontaktstellen zwischen ER und Plasmamembran koppelt. Dieser Ca2+-Einstrom reguliert die NFAT-abhängige Transkription, den Umbau des Zytoskeletts, Sekretion sowie umfassendere calciumabhängige Signalnetzwerke, die Proliferation und Stressantworten steuern. STIM1-abhängige Signalwege sind zentral für die Aktivierung von Immunzellen und weitere Funktionen erregbarer und nicht erregbarer Zellen und verknüpfen eine veränderte Calciumhomöostase mit immunologischen Phänotypen und zusätzlicher Pathophysiologie. In der Humanmedizin wird fehlreguliertes STIM1-Signaling häufig im Kontext eines aberranten Ca2+-Einstroms und nachgeschalteter Transkriptionsprogramme untersucht, die Entscheidungen über den Zellzustand beeinflussen.

Das Stim1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des STIM1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des STIM1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von STIM1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Stim1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von STIM1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Stim1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf STIM1-Exone abzielen, die für die Stim1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere STIM1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Stim1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Stim1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des STIM1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Stim1 HDR-Plasmid (h) und Stim1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von STIM1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten STIM1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.