STI1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423190

Übersicht

Stip1 kodiert das stressinduzierbare Phosphoprotein 1 (STI1, auch als HOP bekannt), ein Co-Chaperon, das HSP70 und HSP90 miteinander verbindet, um Protein-Faltung, -Reifung und die Stabilisierung von Signalproteinen zu koordinieren. In Mauszellen unterstützt STI1 die Proteostase und trägt zu zellulären Antworten auf Hitzeschock, oxidativen Stress und andere proteotoxische Belastungen bei, indem es die Qualitätskontrolle und den Umsatz von Proteinen beeinflusst. Durch die Modulation der Verarbeitung von Chaperon-Klienten kann STI1 Signalwege prägen, die Rezeptor- und Kinase-Signaling, mitochondriale Funktion und zytoskelettale Dynamik steuern. Fehlregulierte Chaperon-Netzwerke unter Beteiligung von STI1 sind in Modellen der Neurodegeneration, der Krebsbiologie und entzündlicher Stressantworten relevant, in denen eine veränderte Proteomstabilität und Stress-Signalisierung häufige Merkmale sind.

Das STI1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Stip1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Stip1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Stip1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die STI1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Stip1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der STI1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Stip1-Exone abzielen, die für die STI1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Stip1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom STI1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom STI1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Stip1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das STI1 HDR-Plasmid (m) und STI1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Stip1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Stip1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.