Stat5b CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423179-ACT

Maus-Stat5b (Signaltransduktor und Aktivator der Transkription 5B) ist ein auf Zytokine und Hormone reagierender Transkriptionsfaktor, der nach Signalübertragung durch Rezeptoren wie den Wachstumshormonrezeptor und mehrere Interleukine stromabwärts von JAK-Kinasen aktiviert wird. Nach Tyrosinphosphorylierung dimerisiert STAT5B, transloziert in den Zellkern und reguliert Genprogramme, die Proliferation, Überleben, Differenzierung und die metabolische Homöostase steuern, mit wichtigen Funktionen in Entwicklung und Aktivität von Immunzellen. Stat5b ist in die Signalweg‑Vernetzung des JAK/STAT‑Pfads mit PI3K–AKT‑ und MAPK‑Signalgebung eingebunden und prägt so kontextabhängige transkriptionelle Outputs. Eine fehlregulierte STAT5B‑Aktivität ist mit aberranten hämatopoetischen und immunologischen Phänotypen verknüpft und wurde in Modellen für Entzündung und onkogene Signalgebung umfassend untersucht.

Stat5b Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Stat5b-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Stat5b Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Stat5b-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Stat5b-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Stat5b-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Stat5b-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Stat5b-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Stat5b-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Stat5b-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.