StAR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400961

Übersicht

STAR kodiert das steroidogene akute regulatorische Protein (StAR), einen mit der Mitochondrienmembran assoziierten Faktor, der den geschwindigkeitsbestimmenden Transfer von Cholesterin von der äußeren zur inneren Mitochondrienmembran vermittelt und damit die Biosynthese von Steroidhormonen einleitet. Dieser Prozess unterstützt die Pregnenolonproduktion durch CYP11A1 und ist mit der cAMP/PKA-Signalgebung, der mitochondrialen Dynamik und dem Lipidtransport in steroidogenen Zellen der Nebenniere und Gonaden verknüpft. Eine Störung des StAR-abhängigen Cholesterintransports beeinträchtigt die Steroidogenese und verändert nachgelagerte, endokrin regulierte Transkriptionsprogramme sowie zelluläre Stressantworten. Varianten oder ein Funktionsverlust von STAR sind mit Phänotypen eines kongenitalen adrenalen Steroidogeneseversagens assoziiert, wodurch StAR ein zentrales Ziel für mechanistische Studien zur mitochondrialen Cholesterinhandhabung und zur Kontrolle steroidogener Signalwege ist.

Das StAR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des STAR-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des STAR-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von STAR nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die StAR-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von STAR-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der StAR-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf STAR-Exone abzielen, die für die StAR-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere STAR-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom StAR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom StAR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des STAR-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das StAR HDR-Plasmid (h) und StAR HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von STAR-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten STAR-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.