STAMBPL1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405119-ACT

STAMBPL1 (STAM-binding protein-like 1) kodiert eine Zink-Metalloprotease-Deubiquitinase der JAMM-Familie, die an der endosomalen Sortierung und der ubiquitinabhängigen Regulation des Membranprotein-Umsatzes beteiligt ist. Durch die Modulation von Deubiquitinierungsereignissen im Zusammenhang mit ESCRT-gekoppeltem Transport beeinflusst STAMBPL1 die Internalisierung von Rezeptoren, die Abschwächung von Signalen und die Proteostase entlang endolysosomaler Signalwege. Seine Aktivität verknüpft Ubiquitin-Signale mit zellulären Antworten wie der Weiterleitung von Wachstumsfaktorrezeptoren, der Dynamik inflammatorischer Signalwege und der stressadaptiven Umgestaltung des Endomembransystems. Eine fehlregulierte Ubiquitin-Bearbeitung und endosomaler Transport sind breit mit Krebsbiologie, Neurodegeneration und Immunfunktionsstörungen assoziiert, wodurch STAMBPL1 einen relevanten Knotenpunkt für mechanistische Studien dieser Prozesse darstellt.

STAMBPL1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen STAMBPL1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

STAMBPL1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des STAMBPL1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der STAMBPL1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen STAMBPL1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native STAMBPL1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von STAMBPL1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des STAMBPL1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem STAMBPL1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.