Plasmide CRISPR d'Activation (h) St3Gal-III: sc-406298-ACT

ST3GAL3 code la sialyltransférase humaine St3Gal-III, une enzyme résidente de l’appareil de Golgi qui catalyse le transfert d’acide sialique en liaison α2,3 sur des glycoconjugués contenant du galactose. En façonnant les profils de sialylation terminale des glycannes N‑ et O‑liés ainsi que des glycolipides, St3Gal-III influence le trafic des glycoprotéines, la reconnaissance cellule–cellule, la dynamique de signalisation des récepteurs et des épitopes glucidiques immunomodulateurs. Cette activité relie ST3GAL3 à des processus plus larges de glycosylation et de voie sécrétoire qui régulent l’adhérence et la migration via le remodelage du glycome de surface cellulaire. Des perturbations génétiques ou régulatrices de ST3GAL3 ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et à des signatures glycosylées altérées pertinentes pour la biologie des maladies, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques des voies dépendantes de la sialylation.

St3Gal-III Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ST3GAL3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

St3Gal-III Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ST3GAL3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ST3GAL3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de St3Gal-III. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ST3GAL3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de St3Gal-III au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie St3Gal-III dans les cellules tumorales présentant une expression de ST3GAL3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.