St3Gal-I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422935
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- St3Gal-I Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im St3Gal-I-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
St3Gal-I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-422935 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Das Mausgen **St3gal1** kodiert die im Golgi lokalisierte Sialyltransferase **St3Gal-I**, die die Addition von **α2,3-gebundener Sialinsäure** an **Galβ1-3GalNAc**-Strukturen katalysiert und dadurch **sialylierte Core-1-O-Glykane** erzeugt. Durch die Prägung des Sialylierungszustands mucinartiger O-Glykoproteine beeinflusst St3Gal-I glykangesteuerte Proteinstabilität, Rezeptorbindung sowie Zell–Zell- und Zell–Matrix-Interaktionen. Diese Aktivität trägt zu umfassenderen, glykosylierungsabhängigen Prozessen wie Immunerkennung, Leukozytenmigration und der Modulation der Signalübertragung an der Zelloberfläche bei. Veränderte **ST3GAL1**-Aktivität und Sialylierungsmuster von Core-1-O-Glykanen wurden mit Entzündung und tumorassoziiertem Glykan-Remodeling in Verbindung gebracht, wodurch **St3gal1** ein nützliches Ziel für mechanistische Studien krankheitsrelevanter Veränderungen der Glykosylierung ist.
Das St3Gal-I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des St3gal1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des St3gal1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von St3gal1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die St3Gal-I-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von St3gal1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der St3Gal-I-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf St3gal1-Exone abzielen, die für die St3Gal-I-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere St3gal1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom St3Gal-I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom St3Gal-I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des St3gal1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das St3Gal-I HDR-Plasmid (m) und St3Gal-I HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von St3gal1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten St3gal1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.