SRPK1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402855-NIC

SRPK1は、セリン／アルギニンに富むタンパク質特異的キナーゼ1（serine/arginine-rich protein-specific kinase 1）をコードしており、SRスプライシング因子をリン酸化してその局在と活性を制御する、pre-mRNAスプライシングの保存的な調節因子である。スプライス部位選択やエクソン取り込みを調節することにより、SRPK1は、細胞周期の進行、ストレス応答、選択的スプライシングに依存するシグナル出力に関連した遺伝子発現プログラムに影響を与える。SRPK1の活性は、リン酸化依存的なRNAプロセシング経路と連携し、アポトーシス、増殖、細胞骨格ダイナミクスに関わる転写産物アイソフォームの構成を変化させ得る。SRPK1を介したスプライシング制御の破綻は、がん生物学、神経変性、血管新生関連機構における疾患関連表現型と関連付けられており、スプライシング依存的な制御機構を解明するための標的として有用であることが示唆されている。

SRPK1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SRPK1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SRPK1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SRPK1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SRPK1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。