SRPK1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423158

Übersicht

Das murine Gen *Srpk1* kodiert die serin/arginin-reiche, protein-spezifische Kinase 1 (SRPK1), einen zentralen Regulator des prä-mRNA-Spleißens durch Phosphorylierung von SR-Proteinen wie SRSF-Faktoren, wodurch deren nukleäre Lokalisation und der Aufbau des Spleißosoms beeinflusst werden. Indem SRPK1 Signaleingänge mit Entscheidungen des alternativen Spleißens koppelt, beeinflusst es Genexpressionsprogramme, die Proliferation, Stressantworten und Differenzierung steuern. Die SRPK1-Aktivität überschneidet sich mit RNA-Prozessierungsnetzwerken, die mit Zellzykluskontrolle und posttranskriptioneller Regulation verbunden sind, und ist daher relevant für Studien zu fehlreguliertem Spleißen, wie es bei Krebs, Neurodegeneration und entzündlichen Zuständen beobachtet wird. In Mausmodellen wird die Störung von SRPK1 häufig genutzt, um zu untersuchen, wie Spleißkinase-Signalisierung gewebespezifische Transkript-Isoformen und nachgelagerte Phänotypen prägt.

Das SRPK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Srpk1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Srpk1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Srpk1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SRPK1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Srpk1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SRPK1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Srpk1-Exone abzielen, die für die SRPK1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Srpk1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SRPK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SRPK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Srpk1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SRPK1 HDR-Plasmid (m) und SRPK1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Srpk1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Srpk1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.