SRPK1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402855-ACT

SRPK1 (quinase 1 específica de proteínas ricas em serina/arginina) é uma quinase humana que fosforila fatores de splicing do tipo SR para regular a montagem do spliceossomo, o splicing alternativo do pré‑mRNA e a exportação de mRNA. Ao acoplar a localização dependente de fosforilação de reguladores de splicing aos outputs transcricionais, a SRPK1 ajuda a moldar programas de isoformas que influenciam a progressão do ciclo celular, as respostas ao stress e a plasticidade de redes de sinalização. A atividade desregulada de SRPK1 e padrões de splicing alterados têm sido associados a isoformas de transcritos angiogénicas e oncogénicas modificadas na biologia do cancro, bem como a defeitos mais amplos de processamento de RNA observados em contextos de doenças neurológicas e metabólicas.

SRPK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SRPK1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SRPK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SRPK1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SRPK1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SRPK1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SRPK1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SRPK1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SRPK1 em células tumorais com expressão de SRPK1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.