Plásmido CRISPR de Activación (h) SREBP-2: sc-400575-ACT

SREBF2 codifica la proteína 2 de unión a elementos reguladores de esteroles (SREBP-2), un factor de transcripción anclado a la membrana que se activa por proteólisis en condiciones de baja disponibilidad de esteroles para inducir genes que controlan la biosíntesis y la captación de colesterol. En conjunto con las proteínas SCAP e INSIG, SREBP-2 regula la vía del mevalonato y la importación de colesterol mediada por el receptor de LDL, coordinando la homeostasis lipídica con el estrés del RE y las señales metabólicas. La actividad alterada de SREBF2/SREBP-2 se ha implicado en la dislipidemia y en fenotipos relacionados con el síndrome metabólico, y también se ha vinculado a una reprogramación de lípidos que favorece la proliferación y la señalización inflamatoria en contextos patológicos. Como nodo central en la detección de esteroles y el control transcripcional, SREBF2 se estudia ampliamente por su papel en la regulación metabólica, la composición de membranas y la interacción con la autofagia y las vías de la inmunidad innata.

SREBP-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SREBF2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SREBP-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SREBF2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SREBF2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SREBP-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SREBF2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SREBP-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SREBP-2 en células tumorales con expresión de SREBF2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.