Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Src Double Nickase Plasmid (m): sc-423151-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Src Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Src Double-Nickase-Plasmid (m) und Src Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Src abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Src: sc-5266
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Src Double Nickase Plasmid (m) | sc-423151-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Src Double Nickase Plasmid (m2) | sc-423151-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen *Src* kodiert die nichtrezeptorische Tyrosinkinase Src, einen zentralen Regulator der Signalweiterleitung nachgeschaltet von Integrinen, Rezeptor-Tyrosinkinasen und Immunrezeptoren. Die Src-Aktivität koordiniert Phosphorylierungskaskaden, die den Umbau des Zytoskeletts, die Dynamik fokaler Adhäsionen, den Fortschritt des Zellzyklus sowie Überlebenswege einschließlich PI3K–AKT und MAPK/ERK steuern. Über diese Netzwerke beeinflusst Src in experimentellen Modellen die zelluläre Migration, Invasionsprogramme und Prozesse im Zusammenhang mit der epithelial-mesenchymalen Transition (EMT). Eine Fehlregulation der Src-Signalgebung ist häufig an onkogener Transformation und metastatischen Phänotypen beteiligt, weshalb Src häufig als Knotenpunkt genutzt wird, um abnorme Kinase-Signalwege in krankheitsrelevanten Kontexten zu untersuchen.
Src Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Src-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Src abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Src-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Src-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.