SR-A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2): sc-422832-KO-2
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- SR-A Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m2) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im SR-A-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SR-A: sc-166139
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SR-A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) | sc-422832-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Msr1 kodiert den Scavenger-Rezeptor der Klasse A (SR-A), einen in Makrophagen angereicherten Mustererkennungsrezeptor, der modifizierte Lipoproteine, apoptotische Zellen und mikrobielle Liganden bindet, um Aufnahmeprozesse und Signalwege der angeborenen Immunität zu koordinieren. SR-A fördert die rezeptorvermittelte Endozytose und Phagozytose und prägt damit den Lipidstoffwechsel, entzündliche Antworten und die Auflösung von Gewebeschäden durch Crosstalk mit Toll-like-Rezeptor-Signalwegen und Zytokinnetzwerken. In Mausmodellen wurde eine veränderte Msr1/SR-A-Aktivität mit einer fehlregulierten Schaumzellbildung, steriler Entzündung und erhöhter Infektanfälligkeit in Verbindung gebracht, was SR-A für Studien zu atheroskleroseähnlichen Prozessen, Neuroinflammation und Mechanismen metabolischer Erkrankungen relevant macht. Seine Expression in myeloischen Zelllinien unterstützt zudem die Forschung zur Makrophagenpolarisation, Antigenverarbeitung und zu Clearance-Mechanismen in komplexen Gewebemikroumgebungen.
Das SR-A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Msr1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Msr1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Msr1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SR-A-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Msr1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SR-A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Msr1-Exone abzielen, die für die SR-A-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Msr1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom SR-A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SR-A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Msr1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SR-A HDR-Plasmid (m) und SR-A HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Msr1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Msr1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.