SR-7 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404174-ACT

HTR7は、ヒトの5-ヒドロキシトリプタミン受容体7（SR-7）をコードしており、主にGαsに共役して細胞内cAMPを増加させ、PKA依存性シグナル伝達を活性化するGタンパク質共役型受容体（GPCR）です。SR-7は神経細胞の興奮性やシナプス可塑性を調節し、cAMP/CREB経路に加えてERK/MAPK経路とのクロストークを介して、下流の転写プログラムにも影響を及ぼし得ます。中枢神経系回路における役割に加え、HTR7シグナルは概日リズム、気分に関連する行動、神経炎症応答の調節とも関連づけられており、神経精神疾患および神経生物学研究における機序解明の要所（メカニスティックノード）としての利用を支持します。また、HTR7が関与するセロトニン作動性GPCRシグナルの変調は、睡眠や情動表現型の文脈でも検討されており、神経伝達物質シグナル伝達と細胞恒常性に焦点を当てた経路解析研究においても重要です。

SR-7 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HTR7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SR-7 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HTR7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHTR7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SR-7の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHTR7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSR-7依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHTR7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSR-7経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。