SR-7 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404174-ACT

HTR7 kodiert den menschlichen 5‑Hydroxytryptamin‑Rezeptor 7 (SR‑7), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der vor allem an Gαs koppelt, um den intrazellulären cAMP‑Spiegel zu erhöhen und eine PKA‑abhängige Signalübertragung zu aktivieren. SR‑7 moduliert die neuronale Erregbarkeit und synaptische Plastizität und kann über cAMP/CREB sowie durch Crosstalk mit ERK/MAPK‑Signalwegen nachgelagerte Transkriptionsprogramme beeinflussen. Neben Funktionen in Schaltkreisen des zentralen Nervensystems wurde HTR7‑Signalgebung mit der Regulation zirkadianer Rhythmen, stimmungsassoziierter Verhaltensweisen und neuroinflammatorischer Antworten in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt in der neuropsychiatrischen und neurobiologischen Forschung stützt. Veränderte serotonerge GPCR‑Signalgebung unter Beteiligung von HTR7 wurde außerdem im Zusammenhang mit Schlaf‑ und affektiven Phänotypen untersucht, wodurch es für pathway‑fokussierte Studien zur Neurotransmitter‑Signalgebung und zur zellulären Homöostase relevant ist.

SR-7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HTR7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SR-7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HTR7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HTR7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SR-7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HTR7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SR-7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SR-7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HTR7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.