SR-2C CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400886-ACT

HTR2Cは、ヒトの5-ヒドロキシトリプタミン受容体2C（SR-2C）をコードするGタンパク質共役受容体（GPCR）であり、主にGq/11を介してシグナルを伝達し、ホスホリパーゼCを活性化して細胞内Ca2+動員を増加させ、PKC依存性のリン酸化カスケードを作動させます。SR-2CはMAPK/ERKシグナルにも影響し、セロトニン作動性回路における神経細胞の興奮性およびシナプス伝達の調節を通じて神経伝達物質放出を制御します。これらの経路を介して、HTR2Cは食欲、気分、ならびに内分泌／自律神経系出力の中枢性制御に寄与し、その機能異常は実験研究および遺伝学的研究において神経精神疾患および代謝に関する表現型と関連づけられています。これらの特性により、HTR2Cは、神経細胞および神経内分泌細胞モデルにおけるGPCRシグナル伝達ダイナミクス、受容体編集／アイソフォームの影響、ならびに経路間クロストークを検討するための有用な標的となります。

SR-2C CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HTR2Cの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SR-2C CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HTR2C 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHTR2C転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SR-2Cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHTR2C遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSR-2C依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHTR2C発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSR-2C経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。