SR-2B CRISPR Activation Plasmid (m): sc-420994-ACT

Das murine Gen **Htr2b** kodiert den Serotoninrezeptor **SR-2B (5-HT2B)**, einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der vorwiegend über **Gq/11** signalisiert und dadurch **Phospholipase C**, den **Inositolphosphat‑Umsatz**, die **Mobilisierung von intrazellulärem Ca²⁺** sowie nachgeschaltete **PKC/ERK‑abhängige Transkriptionsprogramme** aktiviert. SR-2B moduliert neuromodulatorische und periphere serotonerge Signalwege, die **neuronalene Erregbarkeit**, den **Gefäßtonus** und **Gewebeumbau‑Antworten** beeinflussen. Eine veränderte Htr2b‑Aktivität wurde mit fehlregulierten Outputs der Serotonin‑Signalwege in Verbindung gebracht, die für **neurobehaviorale Phänotypen**, **kardiovaskuläre und pulmonale Remodeling‑Prozesse** sowie **entzündliche Signalkontexte** relevant sind. Als membranständiger Rezeptorknoten bietet SR-2B einen gut zugänglichen Ansatzpunkt, um **rezeptorgetriebene Genexpression**, **Second‑Messenger‑Kopplung** und **Pathway‑Cross‑Talk** mit **MAPK‑** und **calciumabhängigen Netzwerken** zu untersuchen.

SR-2B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Htr2b-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SR-2B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Htr2b-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Htr2b-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SR-2B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Htr2b-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SR-2B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SR-2B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Htr2b-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.