SR-1D Double Nickase Plasmid (h): sc-404213-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SR-1D Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SR-1D Double-Nickase-Plasmid (h) und SR-1D Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HTR1D abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SR-1D: sc-398809
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SR-1D Double Nickase Plasmid (h) | sc-404213-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SR-1D Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404213-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HTR1D kodiert den menschlichen Serotonin-(5‑Hydroxytryptamin-)Rezeptor 1D (SR‑1D), einen Gi/o‑gekoppelten GPCR, der die Adenylatcyclase-Aktivität dämpft und das intrazelluläre cAMP senkt, um neuronale Erregbarkeit und die synaptische Freisetzung von Neurotransmittern zu modulieren. Die SR‑1D-Signalübertragung beeinflusst nachgeschaltet von serotonergem Tonus MAPK/ERK-Signalwege und die Regulation von Ionenkanälen und prägt damit die präsynaptische Kontrolle der Monoamin-Transmission im zentralen und peripheren Nervensystem. Der Rezeptor wird in Signalwegen untersucht, die die neurovaskuläre Regulation und nozizeptive Verarbeitung steuern, und eine veränderte serotonerge GPCR-Signalgebung wurde mit Mechanismen neurologischer Erkrankungen in Verbindung gebracht, darunter die Migränebiologie und verwandte Kopfschmerzphänotypen. Störungen von HTR1D werden zudem genutzt, um GPCR-Desensibilisierung, β‑Arrestin-vermitteltes Trafficking und die Regulation serotoninresponsiver Netzwerke auf Schaltkreisebene zu untersuchen.
SR-1D Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HTR1D-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HTR1D abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HTR1D-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HTR1D-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.