Plasmide Double Nickase (m) SQSTM1/p62: sc-422075-NIC

Le gène murin *Sqstm1* code SQSTM1/p62, un adaptateur multifonctionnel qui se lie à des cargos polyubiquitinylés via son domaine UBA et les relie à des autophagosomes LC3-positifs grâce à un motif LIR, coordonnant ainsi l’autophagie sélective et la protéostasie. SQSTM1/p62 sert également de plateforme d’assemblage pour des complexes de signalisation dans la réponse au stress oxydant KEAP1–NRF2 et dans la signalisation NF-κB, intégrant la détection de l’état nutritionnel et les signaux inflammatoires. En tant que nœud induit par le stress, une régulation altérée de SQSTM1/p62 affecte le flux autophagique, l’élimination des agrégats et le contrôle qualité mitochondrial, des processus fréquemment étudiés dans des modèles de neurodégénérescence, de dysfonctionnement métabolique et de biologie tumorale. Ses rôles dans la signalisation dépendante de l’ubiquitine et dans des assemblages protéiques séparés par phases en font un marqueur central dans les études du stress protéotoxique et de la signalisation de l’immunité innée.

SQSTM1/p62 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Sqstm1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Sqstm1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Sqstm1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Sqstm1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.