SQSTM1/p62 Double Nickaseプラスミド (m): sc-422075-NIC

マウスSqstm1はSQSTM1/p62をコードしており、SQSTM1/p62は多機能なアダプタータンパク質である。UBAドメインを介してポリユビキチン化されたカーゴに結合し、LIRモチーフを通じてLC3陽性オートファゴソームへと連結することで、選択的オートファジーとプロテオスタシスを協調的に制御する。さらにSQSTM1/p62は、KEAP1–NRF2による酸化ストレス応答やNF-κBシグナル伝達におけるシグナル複合体の足場としても機能し、栄養状態のセンシングと炎症性シグナルを統合する。ストレス誘導性のハブとして、SQSTM1/p62の制御異常はオートファジーフラックス、凝集体の除去、ミトコンドリア品質管理に影響を及ぼし、これらの過程は神経変性、代謝異常、腫瘍生物学のモデルで頻繁に検討されている。ユビキチンシグナル伝達および相分離したタンパク質集合体における役割から、プロテオトキシックストレスや自然免疫シグナルの研究において中心的な指標となっている。

SQSTM1/p62 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Sqstm1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Sqstm1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Sqstm1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Sqstm1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。