SPUVE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406568

Übersicht

PRSS23 kodiert die Serinprotease SPUVE, ein trypsinähnliches Enzym, das an der perizellulären Proteolyse und am Umbau des extrazellulären Milieus beteiligt ist. Die SPUVE-Aktivität wurde mit der Regulation des Verhaltens epithelialer und stromaler Zellen in Verbindung gebracht, darunter Migration, Adhäsion und Differenzierungsprogramme, die mit proteaseaktivierter Signalübertragung und der Dynamik der extrazellulären Matrix zusammenhängen. Expressions- und Funktionsstudien bringen PRSS23 mit hormonresponsiven und entzündlichen Kontexten in Zusammenhang, was auf eine Relevanz für Gewebeumbauprozesse und dysregulierte Wachstumsphänotypen hindeutet. Diese Eigenschaften machen PRSS23 zu einem nützlichen Ziel, um proteaseabhängige Signalwege zu untersuchen, die Zellzustandsübergänge und Interaktionen mit dem Mikromilieu beeinflussen.

Das SPUVE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PRSS23-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PRSS23-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PRSS23 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SPUVE-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PRSS23-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SPUVE-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PRSS23-Exone abzielen, die für die SPUVE-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PRSS23-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SPUVE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SPUVE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PRSS23-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SPUVE HDR-Plasmid (h) und SPUVE HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PRSS23-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PRSS23-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.