Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sptrx-1: sc-413575-ACT

Le gène humain **TXNDC2** code la protéine **Sptrx-1** (thioredoxine contenant un domaine thioredoxine), spécifique des spermatozoïdes, un facteur redox actif enrichi dans la lignée germinale mâle qui favorise l’échange thiol–disulfure lors de la maturation des spermatides. Sptrx-1 contribue au repliement oxydatif des protéines et au remodelage des ponts disulfure qui sous-tendent la mise en forme de la tête du spermatozoïde, la compaction de la chromatine et la structure du flagelle, la reliant ainsi à l’homéostasie redox cellulaire et aux processus de contrôle qualité des protéines. Un déséquilibre redox dans les cellules germinales en développement est associé à une altération de la fonction spermatique, et une activité modifiée de TXNDC2 a été étudiée dans le contexte de l’infertilité masculine et de phénotypes reproductifs liés au stress oxydatif. En tant que régulateur redox à expression préférentielle dans le testicule, TXNDC2 constitue un point d’entrée pertinent pour analyser comment les voies dépendantes de la thioredoxine influencent la spermatogenèse et la résilience des cellules germinales.

Sptrx-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TXNDC2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sptrx-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TXNDC2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TXNDC2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sptrx-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TXNDC2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sptrx-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sptrx-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TXNDC2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.