Sptrx-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-413575-ACT

Das humane TXNDC2 kodiert das spermiumspezifische Thioredoxin-Domänenprotein Sptrx-1, einen redoxaktiven Faktor, der in der männlichen Keimbahn angereichert ist und während der Spermatidenreifung den Thiol-Disulfid-Austausch unterstützt. Sptrx-1 trägt zur oxidativen Proteinfaltung und zum Umbau von Disulfidbrücken bei, die der Formgebung des Spermienkopfs, der Chromatinverpackung und der Struktur des Flagellums zugrunde liegen, und verbindet es damit mit der zellulären Redoxhomöostase und Prozessen der Proteinkontrolle. Ein gestörtes Redoxgleichgewicht in sich entwickelnden Keimzellen wird mit beeinträchtigter Spermienfunktion in Verbindung gebracht, und eine veränderte TXNDC2-Aktivität wurde im Kontext männlicher Infertilität und oxidativ stressbedingter reproduktiver Phänotypen untersucht. Als testispräferenzieller Redoxregulator bietet TXNDC2 einen gut untersuchbaren Ansatzpunkt, um zu analysieren, wie thioredoxinabhängige Signalwege die Spermatogenese und die Widerstandsfähigkeit von Keimzellen beeinflussen.

Sptrx-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TXNDC2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Sptrx-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TXNDC2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TXNDC2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Sptrx-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TXNDC2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Sptrx-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Sptrx-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TXNDC2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.