Spo11 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404432-ACT

Humanes **SPO11** kodiert Spo11, eine meiosespezifische, topoisomeraseähnliche Endonuklease, die programmierte DNA-Doppelstrangbrüche katalysiert und damit die homologe Rekombination initiiert. Durch die Erzeugung von Brüchen an meiotischen Rekombinations-Hotspots fördert Spo11 die Synapsis, die Bildung von Crossovers und die korrekte Chromosomensegregation während der Gametogenese und ist damit mit Signalwegen verknüpft, die DNA-Reparatur, Rekombination und Genomstabilität steuern. Eine Störung oder Fehlregulation der SPO11-Aktivität kann den meiotischen Ablauf und Rekombinationsergebnisse beeinträchtigen, was sie relevant für Studien zu Infertilität, Aneuploidie und Mechanismen macht, die die chromosomale Integrität schützen. SPO11 dient zudem als Modellfaktor, um die kontrollierte Bildung von DNA-Brüchen und die Wahl von Reparaturwegen in spezialisierten Zellzuständen zu untersuchen.

Spo11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SPO11-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Spo11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SPO11-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SPO11-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Spo11-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SPO11-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Spo11-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Spo11-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SPO11-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.