spectrin α I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403563

Übersicht

SPTA1 kodiert das humane Spektrin α I, einen zentralen Bestandteil des Membranskeletts von Erythrozyten, der mit β‑Spektrin Heterodimere bildet und so ein Gittergerüst zur Stabilisierung der Membran und zur Sicherung ihrer Verformbarkeit aufbaut. Dieses zytoskelettale Netzwerk verbindet integrale Membranproteine mit dem aktinbasierten Junctional‑Komplex und koordiniert die mechanische Belastbarkeit während wiederholter Scherbelastungszyklen im Blutkreislauf. Eine Störung der Spektrinarchitektur beeinträchtigt die Aufrechterhaltung der Erythrozytenform und die Membranintegrität und beeinflusst dadurch Prozesse wie Membrantransport, zytoskelettales Remodeling und die Ionenhomöostase. Genetische Varianten oder ein Mangel an SPTA1 sind mit erblichen Membranerkrankungen der roten Blutkörperchen assoziiert, darunter hereditäre Sphärozytose und Elliptozytose, wodurch SPTA1 ein relevantes Ziel für die Untersuchung von Genotyp‑Phänotyp‑Beziehungen in der Erythroidbiologie darstellt.

Das spectrin α I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SPTA1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SPTA1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SPTA1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die spectrin α I-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SPTA1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der spectrin α I-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SPTA1-Exone abzielen, die für die spectrin α I-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SPTA1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom spectrin α I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom spectrin α I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SPTA1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das spectrin α I HDR-Plasmid (h) und spectrin α I HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SPTA1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SPTA1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.