spectrin α I CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403563

概要

SPTA1 はヒトのスペクトリンαIをコードしており、赤血球膜骨格の中核を成す構成要素です。スペクトリンαIはβスペクトリンとヘテロ二量体を形成し、膜の安定性と変形能を支える格子状構造を組み立てます。この細胞骨格ネットワークは、膜貫通タンパク質をアクチン依存性の接合複合体につなぎ、血流中で繰り返し受けるせん断応力に対して機械的な強靭性を協調的に担保します。スペクトリン構造が破綻すると、赤血球の形状維持や膜の完全性が損なわれ、膜輸送、細胞骨格リモデリング、イオン恒常性などの過程に影響します。SPTA1 の遺伝的変異や欠損は、遺伝性球状赤血球症や楕円赤血球症を含む遺伝性赤血球膜疾患と関連しており、赤血球系生物学における遺伝子型—表現型の関係を研究するうえで重要な標的となります。

spectrin α I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSPTA1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SPTA1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SPTA1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、spectrin α Iタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、spectrin α Iシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SPTA1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• spectrin α Iの機能に不可欠なSPTA1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SPTA1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• spectrin α I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびspectrin α I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SPTA1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  spectrin α I HDRプラスミド（h）および spectrin α I HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSPTA1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSPTA1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。