SPAG5 Lentiviral Activation Particles (h): sc-403607-LAC

SPAG5 (spermienassoziiertes Antigen 5; auch als Astrin bekannt) kodiert ein Mikrotubuli- und Kinetochor-assoziiertes Protein, das während der Mitose die Chromosomenausrichtung und die Spindeldynamik koordiniert. Es wirkt im mitotischen Checkpoint sowie in der Maschinerie der Kinetochor–Mikrotubuli-Anheftung, um eine präzise Trennung der Schwesterchromatiden zu unterstützen und die Genomstabilität zu erhalten. Eine veränderte SPAG5-Expression wurde in mehreren krebsrelevanten Kontexten mit proliferativen Phänotypen, Aneuploidie und einer dysregulierten Zellzyklusprogression in Verbindung gebracht, was SPAG5 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der mitotischen Kontrolle und chromosomalen Instabilität macht. SPAG5 wird daher häufig in Signalwegen untersucht, die die Spindelassemblierung, die Zentrosomenfunktion und Stressantworten im Zusammenhang mit aberranter Zellteilung betreffen.

SPAG5 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente SPAG5-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

SPAG5 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der SPAG5-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen SPAG5-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen SPAG5-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.