SPAG17 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-410482-LAC

SPAG17 codifica l’antigene 17 associato agli spermatozoi (sperm-associated antigen 17), una grande proteina strutturale arricchita nell’apparato assonemale di ciglia e flagelli motili. Sostiene l’architettura ciliare e il battito coordinato attraverso interazioni con componenti basati sui microtubuli che regolano la stabilità dell’assonema, il trasporto intraflagellare e la motilità guidata dalla dineina. Un’alterazione della funzione di SPAG17 è rilevante per i disturbi delle ciglia motili, inclusi la ridotta motilità degli spermatozoi e fenotipi più ampi di disfunzione ciliare che possono compromettere la clearance mucociliare respiratoria e la segnalazione dello sviluppo. Di conseguenza, SPAG17 viene studiato in vie che collegano l’organizzazione del citoscheletro al flusso di fluidi dipendente dalle ciglia, alla polarità cellulare e all’omeostasi tissutale.

Le particelle di attivazione lentivirale SPAG17 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SPAG17 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SPAG17 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SPAG17, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SPAG17. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SPAG17 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.