SPAG17 Lentiviral Activation Particles (h): sc-410482-LAC

SPAG17 kodiert das spermienassoziierte Antigen 17, ein großes Strukturprotein, das im axonemalen Apparat motiler Zilien und Flagellen angereichert ist. Es unterstützt die Zilienarchitektur und das koordinierte Schlagmuster durch Interaktionen mit mikrotubulusbasierten Komponenten, die die Stabilität des Axonems, den intraflagellären Transport und die dyneingetriebene Motilität steuern. Eine veränderte SPAG17-Funktion ist für Erkrankungen motiler Zilien relevant, darunter eine eingeschränkte Spermienmotilität sowie breitere Phänotypen der Ziliendysfunktion, die die mukoziliäre Clearance der Atemwege und entwicklungsbiologische Signalwege beeinträchtigen können. Entsprechend wird SPAG17 in Signalwegen untersucht, die die Organisation des Zytoskeletts mit zilienabhängigem Flüssigkeitsfluss, Zellpolarität und Gewebehomöostase verknüpfen.

SPAG17 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente SPAG17-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

SPAG17 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der SPAG17-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen SPAG17-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen SPAG17-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.