SPACR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406681

Übersicht

IMPG1 kodiert SPACR, ein großes sezerniertes Proteoglykan, das ein zentraler struktureller Bestandteil der retinalen Interphotorezeptor-Matrix ist und zur Adhäsion sowie zum Abstand zwischen den Außensegmenten der Photorezeptoren und dem retinalen Pigmentepithel beiträgt. Durch umfangreiche Glykosylierung und Wechselwirkungen mit anderen Bestandteilen der extrazellulären Matrix unterstützt SPACR die Organisation der Matrix, die Diffusion von Signalmolekülen und die Aufrechterhaltung der Homöostase der Photorezeptoren. Störungen von IMPG1 sind mit erblichen Netzhauterkrankungen, einschließlich Makuladystrophien, assoziiert, was seine Relevanz für Studien zur Integrität der extrazellulären Matrix und zu Signalwegen des Photorezeptor-Überlebens unterstreicht. Als in der Retina angereichertes Matrixprotein wird SPACR außerdem genutzt, um zu untersuchen, wie perizelluläre Matrizen die Zell-Zell-Kommunikation und Stressantworten im Neuroepithel modulieren.

Das SPACR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des IMPG1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des IMPG1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von IMPG1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SPACR-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von IMPG1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SPACR-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf IMPG1-Exone abzielen, die für die SPACR-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere IMPG1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SPACR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SPACR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des IMPG1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SPACR HDR-Plasmid (h) und SPACR HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von IMPG1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten IMPG1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.