Sp9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-436278

Übersicht

Sp9 (Sp9-Transkriptionsfaktor) ist ein Mitglied der Sp/KLF-Familie GC-Box-bindender Proteine, das Genexpressionsprogramme reguliert, welche während der embryonalen Entwicklung Zellschicksalsentscheidungen steuern. Bei der Maus wurde die Sp9-Aktivität mit Musterbildungs- und Differenzierungsprozessen im zentralen Nervensystem und in der Extremität in Verbindung gebracht, wo Sp9 transkriptionelle Netzwerke koordiniert, die die Progenitor-Proliferation und die Gewebemorphogenese beeinflussen. Als nukleärer, DNA-bindender Regulator ist Sp9 in breitere entwicklungsspezifische Signalkontexte eingebunden, darunter Signalwege, die auf die Architektur von Enhancern und Promotoren zusammenlaufen, um linien-/zelltypspezifische Transkription feinzujustieren. Eine fehlregulierte Funktion entwicklungsrelevanter Transkriptionsfaktoren ist häufig mit angeborenen Phänotypen und neuroentwicklungsbedingten Defekten assoziiert, wodurch Sp9 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien genregulatorischer Schaltkreise darstellt.

Das Sp9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sp9-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sp9-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sp9 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Sp9-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sp9-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Sp9-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sp9-Exone abzielen, die für die Sp9-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sp9-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Sp9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Sp9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sp9-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Sp9 HDR-Plasmid (m) und Sp9 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sp9-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sp9-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.