Sp2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405026-ACT

Humanes SP2 kodiert Sp2, einen ubiquitär exprimierten Transkriptionsfaktor der Sp/KLF-Familie, der an GC-reiche Promotorelemente bindet und die basale Transkription von Genen reguliert, die an Zellzyklusprogression, Chromatinorganisation und metabolischer Homöostase beteiligt sind. Die Sp2-Aktivität ist in die von RNA-Polymerase II abhängige Kontrolle der Transkription eingebunden und kann genregulatorische Netzwerke beeinflussen, die durch Promotorarchitektur und epigenetischen Zustand geprägt werden. Fehlregulierte Transkriptionsprogramme der Sp-Familie wurden mit veränderter Proliferation und Stressantwort-Signalgebung in Verbindung gebracht, was die Untersuchung von SP2 in Kontexten wie onkogener transkriptioneller Umverdrahtung und linienspezifischen Differenzierungsdefekten unterstützt. Als nukleärer DNA-bindender Regulator wird Sp2 häufig im Hinblick auf seine Promotorbesetzung, das Crosstalk mit anderen Transkriptionsfaktoren und die Modulation nachgeschalteter Signalwege untersucht.

Sp2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SP2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Sp2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SP2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SP2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Sp2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SP2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Sp2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Sp2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SP2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.