SP140 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409816

Übersicht

SP140 kodiert ein nukleäres, chromatinassoziiertes Protein, das überwiegend in hämatopoetischen und Immunzelllinien exprimiert wird und dort zur Transkriptionsregulation sowie zur Kontrolle des Zellzustands beiträgt. Als Mitglied der SP100/SP140-Familie mit SAND-, PHD- und bromodomänenähnlichen Modulen wird SP140 mit der Erkennung von Chromatinmerkmalen und der Assemblierung regulatorischer Komplexe in Verbindung gebracht, die Entzündungs- und Differenzierungsprogramme feinabstimmen. Es wurde in Signalwege der angeborenen und adaptiven Immunantwort einbezogen, einschließlich der Modulation zytokingetriebener Transkriptionsantworten und von Aktivierungszuständen von Makrophagen. Genetische und funktionelle Studien bringen eine veränderte SP140-Aktivität mit immunvermittelten Erkrankungen in Zusammenhang, was es zu einem nützlichen Ziel für die Aufklärung von Mechanismen der Immungenregulation und epigenetischen Kontrolle macht.

Das SP140 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SP140-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SP140-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SP140 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SP140-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SP140-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SP140-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SP140-Exone abzielen, die für die SP140-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SP140-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SP140 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SP140 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SP140-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SP140 HDR-Plasmid (h) und SP140 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SP140-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SP140-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.