SP140 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409816-ACT

SP140は、PHDドメインおよびブロモドメインを含む核内スペックル状タンパク質をコードしており、クロマチンリーダー兼転写調節因子として機能します。また、免疫系細胞系列で高発現することが知られています。SP140は、自然免疫および獲得免疫応答に関連する遺伝子プログラムのエピジェネティック制御に関与し、インターフェロンシグナル伝達や炎症性転写ネットワークなどの経路に影響を与えます。修飾ヒストンやクロマチン関連複合体との相互作用を介して、SP140は系統特異的な遺伝子発現と細胞活性化状態の形成に寄与します。遺伝学的研究および発現解析により、SP140の制御異常が免疫介在性疾患や炎症性疾患の感受性と関連することが示されており、免疫学およびクロマチン生物学における機序解明研究の観点から重要であることが裏付けられています。

SP140 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SP140の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SP140 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SP140 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSP140転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SP140の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSP140遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSP140依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSP140発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSP140経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。