Sp1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-423094-LAC

Maus-Sp1 (Specificity Protein 1) ist ein ubiquitär exprimierter, GC-Box-bindender Transkriptionsfaktor, der basale und induzierbare Transkriptionsprogramme koordiniert, welche die Zellzyklusprogression, DNA-Schadensantworten, Apoptose und Differenzierung steuern. Durch Interaktionen mit Koaktivatoren und Chromatin-Regulatoren moduliert Sp1 Gennetzwerke, die mit MAPK- und PI3K/AKT-Signalwegen, oxidativen Stressantworten und entzündlichen Transkriptionsprogrammen verknüpft sind. Eine veränderte Sp1-Aktivität wurde mit dysregulierter Proliferation, metabolischer Umprogrammierung sowie aberranter Expression von Genen der extrazellulären Matrix und von Zytokinen in Verbindung gebracht, was Sp1 für Studien zur Krebsbiologie, Neurodegeneration und immunvermittelten Pathologie relevant macht. In Mausmodellsystemen dient Sp1 als zentraler Knotenpunkt zur Untersuchung der transkriptionellen Kontrolle von Housekeeping- und stimulusresponsiven Genen in unterschiedlichsten Geweben.

Sp1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Sp1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Sp1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Sp1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Sp1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Sp1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.