Particules Lentivirales d'Activation (m) SP-lyase: sc-422908-LAC

Le gène murin Sgpl1 code la sphingosine-1-phosphate lyase (SP-lyase), une enzyme associée au réticulum endoplasmique qui clive de manière irréversible la sphingosine-1-phosphate (S1P) en phosphoéthanolamine et hexadécénal, mettant ainsi fin au signal S1P et régulant l’homéostasie intracellulaire des sphingolipides. En contrôlant l’équilibre entre les pools de S1P, de sphingosine et de céramide, la SP-lyase influence des voies qui gouvernent la survie cellulaire, les réponses au stress et la signalisation médiée par les lipides, y compris des processus liés au trafic des cellules immunitaires et à la biologie vasculaire. Une activité altérée de SGPL1 a été associée à une perturbation du métabolisme des sphingolipides et à des phénotypes pertinents pour l’inflammation, les dysfonctions rénales et surrénaliennes, ainsi que des anomalies du neurodéveloppement, faisant de Sgpl1 un nœud utile pour des études mécanistiques des réseaux métaboliques et de signalisation.

Les particules d'activation lentivirales SP-lyase (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Sgpl1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SP-lyase (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Sgpl1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de SP-lyase. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Sgpl1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.