SP-lyase Double Nickase Plasmid (h): sc-402278-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SP-lyase Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SP-lyase Double-Nickase-Plasmid (h) und SP-lyase Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SGPL1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SP-lyase Double Nickase Plasmid (h) | sc-402278-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SP-lyase Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402278-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SGPL1 kodiert die humane Sphingosin-1-phosphat-Lyase (SP-Lyase), ein mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziiertes Enzym, das die irreversible Spaltung von Sphingosin-1-phosphat (S1P) zu Hexadecenal und Phosphoethanolamin katalysiert. Indem sie die S1P-Signalübertragung beendet und den Sphingolipidabbau mit der Phospholipidbiosynthese verknüpft, reguliert die SP-Lyase die Lipidhomöostase, die Membranzusammensetzung sowie bioaktive Lipidgradienten, die Zellmigration, Überleben und Entzündungsreaktionen beeinflussen. Die SGPL1-Aktivität steht in Wechselwirkung mit dem Sphingolipidstoffwechsel, der Ceramid/S1P-Rheostat-Dynamik und nachgeschalteten GPCR-vermittelten Signalwegen, die zelluläre Stressantworten und die Barrierefunktion prägen. Genetische Veränderungen von SGPL1 sind mit Multisystemerkrankungen verbunden, die durch gestörte Sphingolipidprofile gekennzeichnet sind, was ihre Relevanz für mechanistische Studien lipidgetriebener Phänotypen unterstreicht.
SP-lyase Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SGPL1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SGPL1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SGPL1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SGPL1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.