SP Double Nickase Plasmid (h): sc-404996-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SP Double-Nickase-Plasmid (h) und SP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TFF2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SP: sc-517213
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SP Double Nickase Plasmid (h) | sc-404996-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404996-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Trefoil Factor 2 (TFF2) kodiert ein sezerniertes, mucinassoziiertes Peptid, das zum Schutz des Magen- und Darmepithels beiträgt, indem es die Restitution fördert, die Eigenschaften der Schleimbarriere moduliert und die wundassoziierte Migration unterstützt. TFF2 wird bei Schleimhautschädigungen induziert und interagiert mit epithelialen und stromalen Signalnetzwerken, die Entzündungsreaktionen und Gewebeumbau prägen, einschließlich Signalwegen, die mit Zytokinsignalen und der Dynamik der extrazellulären Matrix verknüpft sind. Eine dysregulierte TFF2-Expression wurde mit chronischer Gastritis, entzündlichen Darmerkrankungen und der Tumorentstehung im Gastrointestinaltrakt in Verbindung gebracht, wobei eine veränderte Barrierefunktion und gestörte Wundheilungsprogramme den Krankheitsverlauf beeinflussen können. Als Marker und Mediator der Schleimhautreparatur wird TFF2 in Modellen zur epithelialen Homöostase, Metaplasie und mikroenvironmentgetriebenen Entzündung breit untersucht.
SP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TFF2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TFF2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TFF2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TFF2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.